ogólność
Immunofixacja jest testem laboratoryjnym, który umożliwia identyfikację i typizację globulin gamma obecnych w próbce biologicznej.
Szczegółowo analiza pozwala na badanie - we krwi lub moczu pacjenta - klas immunoglobulin (IgA, IgG, IgM, IgE lub IgD) oraz rodzaju łańcucha lekkiego kappa lub lambda, w zależności od ich specyficznej ruchliwości elektroforetycznej, Następnie, w celu zidentyfikowania, która globulina gamma jest zaangażowana, immunofiksacja obejmuje inokulację specyficznych antygenów dla fragmentu lub odpowiedniego przeciwciała ( antysurowica anty-immunoglobulinowa ): obecność podejrzewanej zmiany potwierdza obecność osadu widocznego gołym okiem lub mikroskopem.
Informacje te mają ogromne znaczenie dla ustalenia, w szczególności, diagnozy patologii komórek plazmatycznych (gammopatie lub dysrrazje komórek plazmatycznych). Immunofixacja jest bardzo przydatna do oceny i monitorowania szpiczaka mnogiego, makroglobulinemii Waldenströma i pierwotnej amyloidozy (zwanej również amyloidozą łańcucha lekkiego).
Co
Immunofiksacja (lub immunoelektroforeza, także w skrócie IFE ) jest techniką zdolną do określenia, czy i która klasa immunoglobulin (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) lub typ łańcucha lekkiego kappa lub lambda jest obecna w nadmiar lub wada surowicy krwi i moczu pacjenta.
Łańcuchy lekkie kappa i lambda charakteryzują składnik monoklonalny, tj. Przeciwciała o tej samej identycznej strukturze chemicznej.
Immunofixacja surowicy i moczu: kiedy jest to wskazane?
Dysplazje lub gammopatie plazmatyczne są niejednorodną grupą zaburzeń o nieznanej etiologii charakteryzujących się:
- Nieproporcjonalna proliferacja klonu komórek B ;
- Obecność w surowicy i / lub moczu typu immunoglobuliny (lub jej podjednostki polipeptydowej), strukturalnie i elektroforetycznie jednorodnej ( monoklonalnej ).
Zwykle dyskrazje komórek plazmatycznych są diagnozowane przy użyciu elektroforezy białek surowicy i moczu, a następnie immunofiksacja surowicy (IFE).
Jednocześnie można przepisać badanie krwi, aby zmierzyć całkowite stężenie immunoglobulin (IgG + IgM + IgA).
Aby dowiedzieć się więcej: Immunoglobuliny - czym są, jak są mierzone i wartościami referencyjnymi »Immunofixation: podstawowa zasada
Immunofixacja jest badaniem, które obejmuje dwie fazy (najpierw elektroforezę w żelu agarozowym, następnie immunoprecypitację ze specyficznymi surowicami odpornościowymi ).
Pierwszy etap immunofiksacji jest taki sam jak w przypadku elektroforezy białek (lub protidogrammy), dlatego konieczne jest zapamiętanie pewnej koncepcji:
- Elektroforeza jest analizą laboratoryjną, która pozwala określić ilość białek obecnych w surowicy krwi lub innych próbkach biologicznych i, dla każdej frakcji, ujawnia, czy występują anomalie w zakresie jakości. W szczególności egzamin ten pozwala na rozdzielenie białek na pięć grup: albumina, alfa 1 globulina, alfa 2 globulina, beta globulina i gamma globulina ; te ostatnie są badane bardziej szczegółowo za pomocą immunofiksacji.
- Elektroforeza jest metodą rozdzielania opartą na różnej prędkości migracji cząstek naładowanych elektrycznie, przez roztwór i obojętny ośrodek nośny, pod wpływem pola elektrycznego, generowanego przez prąd stały. W praktyce egzamin wykorzystuje ładunek elektryczny i masę cząsteczkową białek obecnych w próbce pacjenta. Pod wpływem impulsu pola elektrycznego makrocząsteczki migrują i „grupują” według typu, reagując na stres w charakterystyczny sposób. Wynik ( śledzenie elektroforetyczne ) składa się z różnych pików i krzywych, którym odpowiadają frakcje białkowe. Zwykle pierwszym pikiem, wyższym i węższym, jest szczyt albuminy ; obserwujemy szczyty globulin, znacznie niższe niż albuminy. Wzrost lub spadek amplitudy i intensywności pików, które tworzą się na ścieżce, wskazują na większą lub mniejszą obecność białek w każdej kategorii; im więcej białek jest obecnych w paśmie, tym wyższy jest odpowiedni pik. W przypadku globulin gamma, jeśli chce się poznać ilość każdej z różnych klas (IgA, IgM, IgG itp.), Konieczne będzie zastosowanie pojedynczej dawki. Ogólnie, im więcej gamma globulin znajduje się w paśmie, tym wyższy jest odpowiedni pik; wysokość odpowiada całkowitej ilości białek należących do określonej kategorii.
IMMUNOFISSATION zapewnia:
1) Elektroforeza w żelu agarozowym : próbka pacjenta (surowica lub mocz) jest osadzana na pasku elektroforetycznym, tj. Nośniku do migracji (zazwyczaj żel agarozowy). Dzięki zastosowaniu pola elektrycznego, generowanego przez prąd stały, uzyskuje się separację w różnych pasmach. W praktyce każdy rodzaj globuliny gamma obecnej w mieszaninie (tj. W próbce pacjenta) migruje w oparciu o masę cząsteczkową i ładunek elektryczny. Różna ruchliwość elektroforetyczna gamma globulin umożliwia ich identyfikację (każdy z nich pokrywa się z określonym pasmem na ścieżce elektroforetycznej) i obserwuje wszelkie anomalie.
2) Immunoprecypitacja ze swoistymi surowicami odpornościowymi (utrwalanie) : specyficzne antygeny dla określonego przeciwciała lub fragmentu są dodawane indywidualnie do każdego paska elektroforetycznego (anty-IgG, anty-IgA, anty-IgM, anty-światło kappa lub anty-łańcuch) łańcuch lekki lambda). Jeśli obecne jest białko monoklonalne, oddziaływanie antygenu z odpowiednim przeciwciałem wytworzy wąskie pasmo (oznacza to, że wynik jest pozytywny) i powstanie osadu, widocznego gołym okiem lub mikroskopem. Na koniec próbka jest przetwarzana (tj. Przemywana i barwiona) w celu usunięcia białek, które nie wytrąciły się, w celu uzyskania suszenia żelu i kontynuowania odczytu wyników.
Dlaczego to działa
Czym jest Immunofixation?
Immunofiksacja surowicy jest badaniem wskazanym do diagnozowania lub monitorowania chorób charakteryzujących się zmianą globulin gamma, zwłaszcza gdy dotyczy wytwarzania składnika monoklonalnego ( gammopatia monoklonalna ).
Aby dowiedzieć się więcej: Gammopatie monoklonalne - co i jakie są »Immunofixacja jest przydatna w przypadku podejrzenia dysrrazji komórek plazmatycznych i ma fundamentalne znaczenie w badaniu MIELOMA (i powiązanych patologii) i MGUS (skrót od „gammopatii monoklonalnych o niepewnym znaczeniu”).
Ten test pozwala nam również ocenić makroglobulinemię Waldenströma i amyloidozę lekkiego łańcucha ( AL ).
Immunofixation: kiedy przepisuje się badanie?
Wskazanie do immunofiksacji jest następujące po dowodach klinicznych lub laboratoryjnych, które wzbudzają podejrzenie zmian przeciwciał monoklonalnych lub immunoglobulin w surowicy lub moczu.
Na przykład, ten egzamin pozwala pogłębić wynik elektroforezy seroprotekcyjnej lub moczowej: gdy w śledzeniu elektroforetycznym pasma odpowiadające globulinom gamma odbiegają od normalności, immunofiksacja identyfikuje, które z tych białek jest zmienione pod względem ilości i jakość.
Podsumowując, można przepisać immunofiksację surowicy:
- W przypadku, gdy inne testy laboratoryjne dają nienormalny wynik, pod względem braku lub mniejszej i większej ilości białek osocza w odniesieniu do normy;
- Gdy podejrzewa się obecność chorób charakteryzujących się wytwarzaniem składnika monoklonalnego, takich jak:
- Szpiczak mnogi i jego warianty;
- Makroglobulinemia Waldenströma;
- amyloidoza;
- Gdy u pacjenta wystąpią objawy i oznaki sugerujące obecność gammopatii monoklonalnej lub szpiczaka mnogiego, takie jak:
- Bóle kości;
- niedokrwistość;
- Łatwe zmęczenie;
- Nawracające infekcje;
- Niewyjaśnione złamania.
W przypadku szpiczaka mnogiego elektroforeza białek i immunofiksacji ma duże znaczenie również w monitorowaniu postępu choroby (obserwacja).
Immunofixation: na jakich próbkach można wykonać?
Próbki biologiczne, które można poddać immunofiksacji to głównie:
- Surowica (immunofiksacja surowicy);
- Mocz (immunofiksacja moczu);
- Alkohol * (liquor immunofixation).
* Uwaga : płyn mózgowo-rdzeniowy lub płyn mózgowo-rdzeniowy to płyn, który przenika i chroni mózg, rdzeń kręgowy, nerwy czaszkowe i korzenie kręgosłupa.
Normalne wartości
NEGATYWNY wynik immunofiksacji surowicy i moczu dla monoklonalnych lub poliklonalnych globulin gamma jest uważany za NORMALNY .
Gamma globuliny
Gamma globuliny stanowią 9-20% całkowitych białek osocza.
- Wartość odniesienia Gamma globulina : 0, 9-1, 4 g / dl
W odniesieniu do całkowitego stężenia immunoglobulin ( IgG + IgM + IgA ) uważa się, że wartości między 600 a 2300 mg / dl są normalne.
- Wartość referencyjna Immunogobuliny w surowicy :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Uwaga : przedział referencyjny egzaminu może się nieznacznie różnić w zależności od wieku, płci i oprzyrządowania używanego w laboratorium analitycznym. Z tego powodu lepiej jest sprawdzić zakresy wymienione bezpośrednio w raporcie. Należy również pamiętać, że wyniki analiz muszą być oceniane jako całość przez lekarza ogólnego, który zna historię medyczną pacjenta.
Wysokie wartości - przyczyny
Wzrost globulin gamma może być:
- Poliklonalne, jeśli produkcja immunoglobulin jest heterogenna, to znaczy, że wszystkie składniki gamma globulin - wytworzone lub pochodzące z różnych komórek plazmatycznych - są pod wpływem tego wzrostu;
- Monoklonalne, gdy gamma globuliny są wytwarzane lub pochodzą z jednego typu (klon) komórek plazmatycznych.
Wzrost poliklonalnych gamma globulin może być związany z:
- Przewlekłe choroby zapalne;
- Reumatoidalne zapalenie stawów;
- Toczeń rumieniowaty układowy;
- Przewlekłe choroby wątroby (takie jak zapalenie wątroby i marskość wątroby);
- Ostre i przewlekłe zakażenia;
- Ostatnie szczepienia;
- Niektóre choroby nowotworowe.
Wysokie wartości monoklonalnych globulin gamma mogą wskazywać na obecność:
- Niektóre nowotwory i przewlekłe stany zapalne;
- Szpiczak mnogi;
- chłoniaka;
- Makroglobulinemia Waldenströma.
Nadmiar globuliny gamma nazywany jest hipergammaglobulinemią, natomiast niedobór nazywany jest hipogammaglobulinemią .
Niskie wartości - przyczyny
Redukcja globulin gamma może wskazywać na obecność różnych chorób układu odpornościowego na podłożu genetycznym, w tym agammaglobulinemii lub wtórnego niedoboru odporności (np. AIDS, niewydolność nerek, ostra posocznica i zespół Cushinga).
Zmniejszenie wartości gamma globulin może również zależeć od stosowania leków cytostatycznych, leków immunosupresyjnych i steroidów.
Jak to jest wykonywane
Immunofiksacja surowicy
Immunofiksacja surowicy polega na prostym pobraniu krwi z żyły ramienia. Surowicę otrzymuje się przez wirowanie próbki biologicznej; pozwala to w rzeczywistości na oddzielenie frakcji zawierającej komórki (część korpuskularna) od ciekłej krwi (osocza). Surowica krwi jest wolna od czynników krzepnięcia (fibrynogen, czynnik VIII, czynnik V i protrombina).
Immunofixacja moczu
Aby wykonać immunofiksację moczu, należy zebrać niewielką ilość moczu w specjalnym sterylnym pojemniku. Na podstawie wskazań lekarza i laboratorium próbkę można pobrać bez dokładnego pomiaru czasu ( losowo ) lub w ciągu 24 godzin .
Immunofixacja Alkoholu
Analiza wymaga pobrania niewielkiej ilości płynu mózgowo-rdzeniowego poprzez wprowadzenie igły do jamy kręgosłupa ( nakłucie lędźwiowe ).
przygotowanie
Immunofixation: jak przygotowujesz się do egzaminu?
- Przed pobraniem krwi niektóre laboratoria mogą wymagać od ciebie postu trwającego co najmniej 10-12 godzin. W tym czasie dozwolona jest niewielka ilość wody.
- Immunofiksację można wykonać na moczu pobranym o określonej porze dnia (losowo) lub w ciągu 24 godzin, dlatego należy wcześniej uzyskać odpowiednie jałowe pojemniki.
- Jeśli chodzi o immunofiksację ługu, nie jest konieczne żadne szczególne przygotowanie.
Co może zmienić wynik egzaminu?
Niektóre leki mogą wpływać na wynik immunofiksacji, dlatego zaleca się zgłaszanie lekarzowi wszelkich trwających terapii lekowych.
W ciągu sześciu miesięcy przed badaniem podawanie szczepionek (szczepień) i stosowanie leków, takich jak fenytoina, prokainamid, doustne środki antykoncepcyjne, metadon i terapeutyczna globulina gamma, mogą zwiększać stężenie immunoglobulin. Inne leki, które mogą zmienić wynik testu, to kortykosteroidy, neomycyna, kwas acetylosalicylowy i chloropromazyna.
Interpretacja wyników
Wynik immunofiksacji jest oceniany w połączeniu z wynikami innych analiz. Za interpretację tego odkrycia odpowiada lekarz rodzinny lub specjalista od referencji, który może zidentyfikować i porównać zmiany wpływające na określoną gamma globulinę (na przykład pasmo, które pokrywa się z immunoglobulinami G) na pewne choroby. Ocena ta potwierdza lub wspiera hipotezę diagnostyczną: ogólnie, immunofiksacja może ujawnić normalny profil gamma globuliny lub zidentyfikować białko monoklonalne lub model poliklonalny .
Po zdefiniowaniu choroby immunofiksację można wykonać dla:
- Monitoruj chorobę z upływem czasu, a następnie postępuj zgodnie z jej przebiegiem (kontynuacja);
- Sprawdź skuteczność protokołu terapeutycznego .
Plusy i minusy Immunofixation
W porównaniu do elektroforezy białkowej, immunofixation:
- Jest szybszy : wyniki szczepienia są zwykle uzyskiwane w ciągu trzech godzin;
- Jest bardziej czuły (choć nieznacznie): immunofiksacja może ujawnić immunoglobulinę wykluczoną z elektroforezy białkowej, szczególnie w niskich stężeniach (mniej niż 1 gram / litr).
Co więcej, immunofiksacja:
- Może być częściowo zautomatyzowany ;
- Jest łatwy do odczytania i interpretacji .
Jednak immunofiksacja jest droższa niż elektroforeza białkowa i umożliwia jedynie analizę gamma globulin .
Normalny wynik
W immunofiksacji normalna ścieżka obejmuje:
- Pasmo, które pokrywa się z ciemniejszą immunoglobuliną G ( IgG );
- Pasmo odpowiadające najlżejszej immunoglobulinie A ( IgA );
- Brak prążka dla immunoglobuliny M ( IgM );
- Pasmo kappa jest gęstsze niż pasmo lambda (łańcuch lekki) o stosunku 2: 1.
W normalnym wyniku pasma są duże i następuje stopniowe i jednorodne zmniejszenie gęstości kolorów w kierunku krawędzi paska immunoelektroforezy.
Poliklonalne gamma globuliny
W niektórych przypadkach wszystkie pasma immunofiksacji są równomiernie zasłonięte w tym samym stopniu. Ten model reprezentuje obecność poliklonalnych immunoglobulin . Również w tym przypadku pasma są szerokie i przejście do krawędzi paska immunoelektroforetycznego jest stopniowe. Pasmo IgM - zwykle nieobecne - jest szerokie.
Monoklonalne globiny gamma
Gdy wąska wstęga z ostrymi krawędziami może zostać zidentyfikowana na drodze immunofiksacji, oznacza to, że poszukiwanie składników monoklonalnych jest dodatnie .
Identyfikacja immunoglobuliny monoklonalnej jest przydatna w diagnozie następujących stanów:
- Gammopatia monoklonalna o nieokreślonym znaczeniu (MGUS);
- Szpiczak mnogi;
- Makroglobulinemia Waldenstroma;
- Amyloidoza.
Ponadto immunofiksacja może być stosowana do monitorowania terapii w dyskrazjach komórek plazmatycznych (tj. Szpiczaku mnogim i makroglobulinemii Waldenstroma). Jeśli poziom białka monoklonalnego spada lub nie jest wykrywalny po chemioterapii, może to wskazywać na odpowiedź na leczenie . Przeciwnie, białko monoklonalne utrzymujące się pomimo leczenia jest oznaką opornej choroby .
Uwaga . Ujemny wynik immunofiksacji nie zawsze wyklucza dyskrazję komórek plazmatycznych. Na przykład, niewydzielniczy szpiczak mnogi lub oligosekretyzm może dawać negatywne wyniki zarówno w moczu, jak iw surowicy. Dlatego, jeśli podejrzenie diagnostyczne gammopatii jest nadal wysokie, wskazane jest określenie stosunku łańcuchów lekkich Kappa / Lambda Libere ( stosunek K / L ).
Immunofixacja i diagnoza stwardnienia rozsianego
Immunofiksację płynu mózgowo-rdzeniowego (likieru) przepisuje się, gdy lekarz podejrzewa obecność stwardnienia rozsianego . W tym przypadku określona ścieżka jest charakterystyczna, ponieważ podkreśla obecność tak zwanych pasm oligoklonalnych . Wynik jest podany w raporcie laboratoryjnym jako pozytywny . Należy wziąć pod uwagę, że prążki nie są normalnie obserwowane w immunofiksacji surowicy, ponieważ korelują one z produkcją dokanałowych globulin gamma .
Należy jednak zauważyć, że to odkrycie niekoniecznie potwierdza diagnozę, ponieważ inne stany mogą występować z pasmami oligoklonalnymi w płynie mózgowo-rdzeniowym.
Innymi słowy, identyfikacja pasm oligoklonalnych za pomocą immunofiksacji ługu jest bardzo przydatna do wspierania diagnozy stwardnienia rozsianego, ale musi być potwierdzona przez inne badania . Inne stany, które mogą zapewnić ten wynik, to stany zapalne ośrodkowego układu nerwowego, w tym: zapalenie mózgu związane z HIV, kiła układu nerwowego, neurosarkoidoza, zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych z Lyme, nowotwory złośliwe ośrodkowego układu nerwowego, zapalenie nerwu wzrokowego i poprzeczne zapalenie rdzenia.
