Esej ABTS
Jest to metoda analityczna wykorzystująca pomiar spektrofotometryczny do określenia zdolności antyoksydacyjnej próbki. Za pomocą spektrofotometru UV-Vis mierzy się absorbancję roztworu zawierającego rodnik ABTS • +, wytwarzanego przez utlenianie ABST (2, 2'-azinobis (3-etylobenzotiazolin-6-sulfonian), bezbarwnej substancji w postaci rodniki są zabarwione przez absorpcję na charakterystykach długości fali w zakresie widzialnym. Dodatek do roztworu ABTS + + cząsteczek przeciwutleniających, które mogą działać poprzez przenoszenie zarówno wodoru, jak i elektronu, determinuje redukcję rodnika do postaci bezbarwnej, z konsekwentnym odbarwieniem mieszaniny reakcyjnej. To bielenie, proporcjonalne do ilości obecnego przeciwutleniacza, można zmierzyć jako spadek absorbancji w pewnym czasie przy określonej długości fali (734 nm). Moc antyoksydacyjna jest wyrażona przez porównanie z wartości absorbancji zmierzone dla znanych ilości cząsteczki przeciwutleniającej wybranej jako wzorzec odniesienia, którym jest zwykle kwas askorbinowy lub Trolox (w tym przypadku mówimy o aktywności przeciwutleniającej TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity.
Pomiar mocy przeciwutleniaczy oparty na zastosowaniu ABTS ma tę zaletę, że jest prosty i szybki. Ponadto pozwala na pomiar substancji antyoksydacyjnych zarówno hydrofilowych, jak i lipofilowych w szerokim zakresie pH. Należy jednak pamiętać, że stosowany rodnik (ABTS • +) nie jest fizjologiczny i nie występuje w układach biologicznych, a problemy powtarzalności pomiarów wynikające z kinetyki reakcji różnych przeciwutleniaczy są często podkreślane.
FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Test FRAP mierzy zdolność przeciwutleniaczy do redukcji jonów żelaza. Jest to metoda oparta na transferze elektronów, w której jony żelaza przechodzą z Fe3 + do Fe2 +. W pewnych warunkach pH (3, 6) iw obecności TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pirydylo) -s-triazyny), jony te tworzą kompleksy o różnych właściwościach, w szczególności zredukowanej pochodnej (Fe2 + -TPTZ) przyjmuje kolor niebieski, który ma maksymalną absorpcję przy 593 nm, którą można zmierzyć spektrofotometrycznie. Zdolność do redukcji substancji przeciwutleniającej można zatem mierzyć jako zmianę absorbancji roztworu zawierającego utleniacz na długości fali ustalonej przez porównanie ze zmianą względem wzorca (np. Kwasu askorbinowego).
Test FRAP został zaprojektowany do pomiaru mocy redukującej plazmy, ale został następnie dostosowany do testowania zdolności antyoksydacyjnej czystych związków i złożonych matryc. W rzeczywistości, ponieważ metoda ta pozwala ocenić tylko zdolność redukcji przez transfer elektronów, całkowicie ignorując działanie przeciwutleniaczy, które działają poprzez transfer wodoru, nie pozwala na pomiar udziału cząsteczek, takich jak tiole i białka, które odgrywają rolę antyoksydacyjną podstawowe w płynach biologicznych (np. krew). Zaletą stosowania tej metody jest to, że jest to jedna z najprostszych, najszybszych i najtańszych metod określania zdolności antyoksydacyjnej in vitro.
DPPH TEST
2, 2-difenylo-1-pikrylohydrazyl (DPPH •) jest bardzo stabilnym i dostępnym w handlu rodnikiem azotowym, charakteryzującym się intensywnym fioletowo-czerwonym kolorem, który tępi po zmniejszeniu w obecności cząsteczki o zdolności antyoksydacyjnej. Dzięki pomiarowi spektrofotometrycznemu przy 517 nm zmiany absorbancji roztworu DPPH po reakcji ze związkiem przeciwutleniającym możliwe jest ilościowe określenie zdolności redukcyjnej badanej substancji, niezależnie od tego, czy działa ona z przeniesieniem wodoru lub przeniesieniem elektronu. Wynik ogólnie wyraża się jako IC50, tj. Ilość przeciwutleniacza zdolną do obniżenia początkowego stężenia DPPH o 50%.
Jest to szybka, prosta i niedroga metoda. Ograniczenia tej techniki analitycznej wynikają z możliwości, że wyniki analizy są zniekształcone w przypadku, gdy badane cząsteczki absorbują w tym samym zakresie długości fali rodnika DPPH lub w obecności dużych cząsteczek skulonych sterycznie, które nie są reagują z reaktywną częścią radykała. Powoduje to, że DPPH reaguje z przeciwutleniaczami do 1000 razy wolniej niż rodniki nadtlenkowe.
TEST PCL (fotochemiluminescencja)
Test PCL opiera się na reakcji określonego rodzaju rodnika, anionu ponadtlenkowego (O2 • -), wytwarzanego fotochemicznie przez promieniowanie UV, ze związkiem zdolnym do emitowania chemiluminescencji. Stosowanym markerem jest luminol, cząsteczka, która utleniona przez wolne rodniki emituje światło, które można zmierzyć za pomocą specjalnego instrumentu (Photochem®). Obecność substancji przeciwutleniających w mieszaninie pokarmowej dezaktywuje ugrupowania rodnikowe hamujące emisję chemiluminescencji. Analiza PCL jest bardzo szybka i wrażliwa. Ponadto, dzięki zastosowaniu dwóch różnych protokołów analitycznych, zwanych ACW (Antioxidant Capacity Water rozpuszczalne) i ACL (Antioxidant Capacity Lipid rozpuszczalne), udział w całkowitej zdolności antyoksydacyjnej rozpuszczalnego w wodzie składnika (flawonoidy, witamina E) można zmierzyć dla tego samego związku. C, aminokwasy itp.) Niż rozpuszczalny w tłuszczach (tokoferole, tokotrienole, karotenoidy itp.). Zdolność antyoksydacyjną badanego produktu uzyskuje się przez porównanie wartości zarejestrowanych z pomiarami dotyczącymi standardowych cząsteczek odniesienia, kwasu askorbinowego dla protokołu ACL i Trolox dla protokołu ACW.
